在藥品檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品分析等關(guān)鍵領(lǐng)域，高效液相色譜儀（HPLC）的檢測(cè)數(shù)據(jù)直接決定實(shí)驗(yàn)結(jié)論的可靠性。而校驗(yàn)作為保障儀器性能穩(wěn)定的核心環(huán)節(jié)，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系中的一環(huán)。無(wú)論是新購(gòu)儀器的驗(yàn)收，還是日常使用中的性能確認(rèn)，掌握科學(xué)的校驗(yàn)方法都至關(guān)重要。本文結(jié)合國(guó)標(biāo)要求與行業(yè)實(shí)踐，詳細(xì)拆解HPLC校驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)、核心方法及合理周期，助力實(shí)驗(yàn)室合規(guī)運(yùn)營(yíng)。

先搞懂：HPLC校驗(yàn)的兩大核心場(chǎng)景

HPLC的校驗(yàn)并非“一刀切”，需根據(jù)儀器使用階段區(qū)分場(chǎng)景，不同場(chǎng)景的校驗(yàn)重點(diǎn)差異顯著：

- 首次校驗(yàn)/驗(yàn)收校驗(yàn)：新儀器安裝調(diào)試后，或儀器經(jīng)過(guò)大修、核心部件更換后，必須進(jìn)行全面的性能驗(yàn)證，確認(rèn)儀器符合使用要求后方可投入使用。

- 定期校驗(yàn)/期間核查：儀器正常使用過(guò)程中，為持續(xù)監(jiān)控其性能穩(wěn)定性，避免因儀器漂移導(dǎo)致檢測(cè)誤差，需按固定周期進(jìn)行的常規(guī)性能確認(rèn)，是實(shí)驗(yàn)室日常質(zhì)量控制的關(guān)鍵動(dòng)作。

一、HPLC校驗(yàn)必須遵循的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)

校驗(yàn)工作的核心是“有標(biāo)可依”，國(guó)內(nèi)外針對(duì)HPLC的校驗(yàn)已形成完善的標(biāo)準(zhǔn)體系，實(shí)驗(yàn)室需結(jié)合自身領(lǐng)域（如制藥、食品、環(huán)境）選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，確保校驗(yàn)合規(guī)性。

1. 中國(guó)法定強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)：JJG 705-2014

由國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定的《液相色譜儀檢定規(guī)程》（JJG 705-2014），是國(guó)內(nèi)HPLC校驗(yàn)的“根本遵循”，具有法律效力。該標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定了HPLC各部件的檢定項(xiàng)目、技術(shù)指標(biāo)、環(huán)境條件及具體檢測(cè)方法，適用于各類(lèi)液相色譜儀的法定檢定，實(shí)驗(yàn)室必須嚴(yán)格執(zhí)行。

2. 國(guó)際通用行業(yè)指南：制藥領(lǐng)域重點(diǎn)參考

在制藥、醫(yī)藥研發(fā)等對(duì)數(shù)據(jù)要求極高的領(lǐng)域，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)是校驗(yàn)工作的重要補(bǔ)充，其中常用的包括：

- USP <1058> 分析儀器確認(rèn)：美國(guó)藥典提出的儀器確認(rèn)體系（DQ設(shè)計(jì)確認(rèn)、IQ安裝確認(rèn)、OQ運(yùn)行確認(rèn)、PQ性能確認(rèn)），是全球制藥行業(yè)儀器校驗(yàn)的通用框架，明確了從儀器采購(gòu)到日常使用的全流程校驗(yàn)要求。

- ICH Q2(R1) 分析方法驗(yàn)證：國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)發(fā)布的指南，雖聚焦分析方法驗(yàn)證，但明確要求儀器性能必須滿足方法驗(yàn)證的指標(biāo)，是校驗(yàn)結(jié)果的重要評(píng)判依據(jù)。

- GMP藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范：國(guó)內(nèi)及國(guó)際GMP均強(qiáng)制要求，用于藥品放行、中間產(chǎn)品檢測(cè)的HPLC必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的確認(rèn)和定期校驗(yàn)，且校驗(yàn)記錄需完整歸檔。

3. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部SOP：個(gè)性化補(bǔ)充

多數(shù)規(guī)范實(shí)驗(yàn)室會(huì)結(jié)合國(guó)標(biāo)、國(guó)際指南及儀器廠商的操作說(shuō)明，制定內(nèi)部的《HPLC校驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，對(duì)校驗(yàn)細(xì)節(jié)進(jìn)行細(xì)化，部分指標(biāo)甚至?xí)?yán)于外部標(biāo)準(zhǔn)，以滿足特定檢測(cè)需求。

二、實(shí)操干貨：HPLC核心校驗(yàn)項(xiàng)目與方法

HPLC校驗(yàn)的本質(zhì)是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和規(guī)范流程，測(cè)試儀器關(guān)鍵性能指標(biāo)是否達(dá)標(biāo)。常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括萘、尿嘧啶、氧化鈥濾光片、藥典對(duì)照品等，需在符合要求的環(huán)境（溫度15-30℃，濕度40%-75%，無(wú)振動(dòng)、電磁干擾）下進(jìn)行測(cè)試。以下是6大核心校驗(yàn)項(xiàng)目的詳細(xì)操作方法及驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：

標(biāo)準(zhǔn)校驗(yàn)流程5步法

校驗(yàn)工作需嚴(yán)格遵循“準(zhǔn)備-執(zhí)行-計(jì)算-判斷-歸檔”的閉環(huán)流程，確保每一步可追溯：

1. 前期準(zhǔn)備：按SOP配制流動(dòng)相（需過(guò)濾脫氣）、標(biāo)準(zhǔn)品溶液，安裝適配的色譜柱（如C18柱），開(kāi)機(jī)平衡系統(tǒng)至壓力、基線穩(wěn)定。

2. 項(xiàng)目執(zhí)行：按上述項(xiàng)目逐一測(cè)試，實(shí)時(shí)記錄原始數(shù)據(jù)（包括流速、壓力、溫度、峰面積、保留時(shí)間等關(guān)鍵信息），不可事后補(bǔ)記。

3. 數(shù)據(jù)處理：用Excel或?qū)I(yè)軟件計(jì)算RSD、偏差、線性回歸方程等參數(shù)，確保計(jì)算過(guò)程無(wú)誤。

4. 結(jié)果判斷：將計(jì)算值與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，全部達(dá)標(biāo)則判定“校驗(yàn)合格”；任一指標(biāo)超標(biāo)需停機(jī)排查原因（如更換色譜柱、校準(zhǔn)檢測(cè)器）后重新校驗(yàn)。

5. 報(bào)告歸檔：生成包含儀器信息、校驗(yàn)人員、原始數(shù)據(jù)、結(jié)論的校驗(yàn)報(bào)告，與標(biāo)準(zhǔn)品證書(shū)、SOP一同歸檔，保存期至少符合行業(yè)法規(guī)要求（如制藥行業(yè)至少5年）。

三、合理設(shè)定校驗(yàn)周期：既合規(guī)又高效

校驗(yàn)周期并非固定不變，需結(jié)合“法規(guī)要求+儀器使用情況+風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)”綜合設(shè)定，避免過(guò)度校驗(yàn)增加成本或校驗(yàn)不足導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)。

1. 法定強(qiáng)制檢定：2年一次，不可逾期

根據(jù)JJG 705-2014的強(qiáng)制要求，HPLC的法定檢定周期為2年。但出現(xiàn)以下情況需提前檢定：儀器搬運(yùn)至新場(chǎng)地、更換泵頭/檢測(cè)器等核心部件、檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常且懷疑儀器問(wèn)題時(shí)。未按規(guī)定完成檢定的儀器，不得用于出具法定檢測(cè)報(bào)告。

2. 定期校驗(yàn)與期間核查：分級(jí)管理

除法定檢定外，實(shí)驗(yàn)室需建立“全面校驗(yàn)+期間核查”的常態(tài)化機(jī)制，具體周期可參考：

- 年度全面校驗(yàn)：每年進(jìn)行1次完整的OQ/PQ確認(rèn)，覆蓋上述所有核心校驗(yàn)項(xiàng)目，相當(dāng)于對(duì)儀器性能進(jìn)行“全面體檢”。

- 季度/半年期間核查：簡(jiǎn)化版校驗(yàn)，重點(diǎn)測(cè)試系統(tǒng)整體性能（柱效、保留時(shí)間重復(fù)性、進(jìn)樣精度），快速確認(rèn)儀器是否處于受控狀態(tài)，適合日常監(jiān)控。

- 每日/每周系統(tǒng)適用性測(cè)試：每次正式檢測(cè)前，進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品確認(rèn)基線、峰形、保留時(shí)間正常，雖非嚴(yán)格意義上的“校驗(yàn)”，但能及時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)日儀器異常，是實(shí)驗(yàn)室的必備操作。

3. 特殊場(chǎng)景：縮短周期，強(qiáng)化管控

對(duì)于用于藥品放行檢測(cè)、食品安全仲裁、司法鑒定等關(guān)鍵場(chǎng)景的HPLC，需適當(dāng)縮短校驗(yàn)周期，建議“每半年全面校驗(yàn)+每月期間核查”；若儀器使用頻率極高（如每天運(yùn)行8小時(shí)以上），也應(yīng)相應(yīng)縮短周期，避免性能衰減導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)。

四、實(shí)驗(yàn)室校驗(yàn)管理核心建議

1. 建立“一機(jī)一檔”：為每臺(tái)HPLC建立專屬檔案，記錄儀器型號(hào)、采購(gòu)時(shí)間、歷次校驗(yàn)報(bào)告、維修記錄等信息，實(shí)現(xiàn)全生命周期管理。

2. 明確責(zé)任分工：指定專人負(fù)責(zé)HPLC的日常維護(hù)與校驗(yàn)工作，校驗(yàn)人員需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，具備相應(yīng)資質(zhì)（如計(jì)量檢定員證書(shū)）。

3. 動(dòng)態(tài)調(diào)整周期：若期間核查中多次出現(xiàn)指標(biāo)接近臨界值，或儀器頻繁出現(xiàn)故障，需立即縮短全面校驗(yàn)周期，并排查根本原因。

4. 重視異常處理：校驗(yàn)不合格的儀器需張貼“暫停使用”標(biāo)識(shí)，維修后重新校驗(yàn)合格方可恢復(fù)使用，嚴(yán)禁“帶病運(yùn)行”。

HPLC校驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)可靠性的“壓艙石”，需結(jié)合法定標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)際需求，建立科學(xué)、規(guī)范的校驗(yàn)體系。只有將校驗(yàn)工作落到實(shí)處，才能確保儀器始終處于佳性能狀態(tài)，為各類(lèi)檢測(cè)工作提供精準(zhǔn)、可靠的數(shù)據(jù)支撐。

HPLC校驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答

問(wèn)題1：HPLC的法定檢定和實(shí)驗(yàn)室定期校驗(yàn)有什么區(qū)別？

兩者核心區(qū)別體現(xiàn)在性質(zhì)、依據(jù)和周期上：法定檢定是具有法律效力的強(qiáng)制要求，必須依據(jù)JJG 705-2014執(zhí)行，周期固定為2年，由具備資質(zhì)的計(jì)量機(jī)構(gòu)完成，結(jié)果直接關(guān)系儀器能否用于出具法定報(bào)告；實(shí)驗(yàn)室定期校驗(yàn)是內(nèi)部質(zhì)量控制手段，可結(jié)合USP <1058>、GMP等標(biāo)準(zhǔn)及自身需求制定方案，包括年度全面校驗(yàn)和季度/半年期間核查，目的是持續(xù)監(jiān)控儀器日常性能，周期可動(dòng)態(tài)調(diào)整。

問(wèn)題2：校驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)偏差超標(biāo)，該怎么處理？

首先應(yīng)暫停儀器使用并張貼“暫停使用”標(biāo)識(shí)，避免誤用導(dǎo)致數(shù)據(jù)錯(cuò)誤；其次排查常見(jiàn)原因，如檢測(cè)器光路污染、濾光片偏移等，可按儀器SOP進(jìn)行光路清潔、重新校準(zhǔn)濾光片位置；若自行排查無(wú)效，需聯(lián)系儀器廠商售后進(jìn)行專業(yè)維修，更換故障部件（如波長(zhǎng)校正組件）；維修完成后，需重新對(duì)紫外檢測(cè)器進(jìn)行波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校驗(yàn)，確認(rèn)偏差≤±2 nm后方可恢復(fù)使用，整個(gè)過(guò)程需詳細(xì)記錄在儀器檔案中。

問(wèn)題3：用于藥品放行的HPLC，校驗(yàn)周期可以和普通檢測(cè)用儀器一樣嗎？

不建議采用相同周期。藥品放行檢測(cè)直接關(guān)聯(lián)藥品質(zhì)量與用藥安全，屬于高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)景，對(duì)儀器性能穩(wěn)定性要求更高。普通檢測(cè)用HPLC可遵循“2年法定檢定+1年全面校驗(yàn)+季度期間核查”的常規(guī)模式；而藥品放行用HPLC需強(qiáng)化管控，建議縮短周期，如“2年法定檢定+半年全面校驗(yàn)+每月期間核查”，同時(shí)在每次檢測(cè)前必須進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試，確保儀器當(dāng)日性能符合檢測(cè)要求，若期間核查出現(xiàn)指標(biāo)波動(dòng)，需進(jìn)一步縮短校驗(yàn)間隔。