一、 目的

規(guī)范高效液相色譜儀的操作、使用和維護(hù)，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性和儀器安全穩(wěn)定運(yùn)行，延長(zhǎng)儀器使用壽命。

二、 適用范圍

適用于所有使用本實(shí)驗(yàn)室高效液相色譜儀進(jìn)行分析檢測(cè)的人員。

三、 安全注意事項(xiàng)

個(gè)人防護(hù)：操作時(shí)必須穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套和防護(hù)眼鏡。

溶劑安全：

了解所用流動(dòng)相（甲醇、乙腈、緩沖鹽等）的毒性和易燃性，在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行操作。

廢棄流動(dòng)相和樣品需按規(guī)定分類收集，妥善處理。

壓力安全：

系統(tǒng)高壓力不得超過(guò)泵和色譜柱的耐壓極限。

在開啟泵前，確保流路暢通，排空閥已擰緊，避免壓力急劇升高。

用電安全：儀器應(yīng)接地良好，防止溶劑泄漏到電路部分。

色譜柱保護(hù)：使用符合要求的流動(dòng)相和樣品，防止色譜柱堵塞或化學(xué)損壞。

四、 關(guān)鍵注意事項(xiàng)

流動(dòng)相“三必須”：

必須使用色譜純?nèi)軇┖统兯?/span>

必須經(jīng)過(guò) 0.45 μm或0.22 μm濾膜過(guò)濾。

必須進(jìn)行超聲脫氣，防止氣泡進(jìn)入系統(tǒng)。

緩沖鹽“三忌”：

忌存不沖：實(shí)驗(yàn)結(jié)束必須用高比例水相（≥10%）沖洗≥30分鐘，徹底置換鹽分，再轉(zhuǎn)換到有機(jī)相保存。

忌現(xiàn)配不用：必須現(xiàn)用現(xiàn)配，防止長(zhǎng)菌變質(zhì)。

忌沉淀：嚴(yán)禁將高濃度緩沖鹽與高比例有機(jī)相直接混合，防止結(jié)晶析出。

色譜柱“三核心”：

方向：確保流動(dòng)相流向與柱體箭頭方向一致，嚴(yán)禁反接。

保存：長(zhǎng)期不用時(shí)，必須用純有機(jī)相（如甲醇、乙腈）沖洗并保存在其中。

兼容：確保流動(dòng)相pH值、溶劑與色譜柱固定相兼容，不超出使用范圍。

樣品“兩匹配”：

樣品溶劑強(qiáng)度應(yīng)與初始流動(dòng)相匹配或更弱，以防峰形畸變。

樣品必須清澈透明，建議過(guò)濾后進(jìn)樣。

關(guān)機(jī)“一絕對(duì)”：

絕對(duì)禁止在含緩沖鹽的流動(dòng)相中直接關(guān)機(jī)，必須執(zhí)行“水相過(guò)渡”沖洗流程。

五、 操作流程

（一） 開機(jī)前準(zhǔn)備

環(huán)境檢查：檢查實(shí)驗(yàn)室溫度（一般15-30℃）和濕度是否穩(wěn)定。

流動(dòng)相準(zhǔn)備：過(guò)濾、脫氣。緩沖鹽現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣品準(zhǔn)備：完全溶解，并用與流動(dòng)相初始組成相近的溶劑稀釋、過(guò)膜。

儀器檢查：檢查廢液瓶容量、管路漏液和色譜柱連接。

（二） 開機(jī)與系統(tǒng)初始化

依次打開穩(wěn)壓電源、電腦、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱，后打開輸液泵。

啟動(dòng)工作站，等待系統(tǒng)自檢就緒。

（三） 方法編輯與參數(shù)設(shè)置

在工作站中設(shè)置：

泵：流動(dòng)相比例、流速、壓力上下限。

檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)、采樣頻率。

柱溫箱：溫度。

自動(dòng)進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積、洗針程序。

運(yùn)行時(shí)間。

（四） 系統(tǒng)平衡

Purge：打開排空閥，對(duì)各通道進(jìn)行Purge，排除氣泡后擰緊排空閥。

平衡：以方法初始條件運(yùn)行，直至基線平穩(wěn)、壓力穩(wěn)定。

（五） 樣品分析

放置樣品，編輯序列。

保存并運(yùn)行序列，實(shí)時(shí)監(jiān)控基線和壓力。

（六） 數(shù)據(jù)處理與報(bào)告

進(jìn)行積分、校準(zhǔn)、計(jì)算并生成報(bào)告。

（七） 關(guān)機(jī)

沖洗：

若有緩沖鹽：先用超純水沖洗≥30分鐘，再用甲醇/乙腈沖洗≥30分鐘。

若無(wú)緩沖鹽：直接用甲醇/乙腈沖洗≥15分鐘。

停機(jī)：流速降為0，在軟件中關(guān)閉各模塊，依次關(guān)閉硬件電源。

登記：填寫儀器使用記錄。

六、 日常維護(hù)

泵：定期檢查并更換泵密封圈。

進(jìn)樣器：定期清洗或更換進(jìn)樣針、轉(zhuǎn)子密封墊。

檢測(cè)器：定期更換氘燈。

色譜柱：充分沖洗后妥善保存。

七、 常見(jiàn)問(wèn)題與排查

問(wèn)1：系統(tǒng)壓力異常偏高可能是什么原因？如何處理？

答：常見(jiàn)原因是堵塞。

處理：首先排查并更換或清洗保護(hù)柱。若無(wú)效，可能色譜柱或在線過(guò)濾器堵塞，需進(jìn)行反沖（若允許）或更換。若使用了緩沖鹽，考慮是否為鹽析，用高比例水相低速?zèng)_洗。

問(wèn)2：系統(tǒng)壓力過(guò)低或劇烈波動(dòng)怎么辦？

答：通常由氣泡或漏液引起。

處理：首先對(duì)所有流動(dòng)相通道進(jìn)行充分Purge排氣。若壓力仍不穩(wěn)定，仔細(xì)檢查所有管路接頭（特別是泵頭和進(jìn)樣器）是否有漏液，并擰緊或更換部件。

問(wèn)3：基線噪音很大可能是什么問(wèn)題？

答：可能原因有三類。

處理：

檢查氘燈：若使用時(shí)間超過(guò)2000小時(shí)，考慮更換。

檢查流動(dòng)相：重新配制新鮮流動(dòng)相并脫氣。

檢查氣泡：通過(guò)Purge和提高流速?zèng)_走檢測(cè)器中的氣泡。

問(wèn)4：色譜峰出現(xiàn)拖尾或分叉如何排查？

答：主要與色譜柱和樣品有關(guān)。

處理：

檢查色譜柱：使用柱效測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品判斷柱效是否下降，必要時(shí)沖洗再生或更換色譜柱。

檢查樣品溶劑：確保樣品溶劑強(qiáng)度不高于初始流動(dòng)相。

檢查連接：確認(rèn)色譜柱兩端管路連接緊密，無(wú)死體積。

問(wèn)5：分析過(guò)程中出現(xiàn)“鬼峰”怎么辦？

答：鬼峰通常來(lái)自污染。

處理：

進(jìn)行空白運(yùn)行：不進(jìn)樣采集數(shù)據(jù)，若仍有鬼峰，則污染來(lái)自系統(tǒng)或流動(dòng)相。

清洗系統(tǒng)：用強(qiáng)溶劑沖洗整個(gè)流路。

更換流動(dòng)相：使用新鮮配制的流動(dòng)相。

加強(qiáng)洗針：增加自動(dòng)進(jìn)樣器的洗針次數(shù)和強(qiáng)度，防止交叉污染。