液相色譜儀根據固定相的不同，主要分為液 - 液色譜（LLC）和液 - 固色譜（LSC）兩類?，F在常用的液相色譜系統(tǒng)，一般都包含高壓輸液泵、進樣裝置、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器和信號記錄系統(tǒng)這些關鍵部件。和傳統(tǒng)的液相柱色譜設備比起來，它在分析速度、分離效率和檢測靈敏度上都有明顯優(yōu)勢，能幫實驗人員更高效地完成分析工作。

在液相色譜分析里，色譜柱的日常清洗和正確存放特別關鍵，直接關系到它的性能能不能穩(wěn)定發(fā)揮，所以這兩個環(huán)節(jié)一定要做好。

一、液相色譜儀色譜柱的清洗

每次做完樣品分析，都得及時清洗色譜柱，不然樣品殘留或者雜質堆在柱里，時間久了會影響柱子性能。具體怎么洗，要根據用的色譜模式和流動相的成分來定，不能一概而論。

1. 不同色譜模式的清洗方法

反相色譜柱：做反相色譜分析時，極性大的組分先流出來，柱里容易留下極性小的物質。這時候就得用洗脫能力強的溶劑沖洗，像 100% 甲醇、異丙醇或者四氫呋喃（C?H?O）都可以，通常用相當于柱體積 20 倍左右的溶劑洗一遍，就能把殘留物質沖干凈。

含緩沖鹽流動相的清洗：要是分析時用了緩沖鹽當流動相，換有機溶劑之前，必須先用蒸餾水把色譜柱徹底沖干凈 —— 這一步可不能省，一旦跳過，鹽分結晶很可能堵住柱體或者系統(tǒng)流路，后續(xù)疏通會特別麻煩。沖完蒸餾水，再用合適的溶劑接著清洗就行。

凝膠柱：凝膠過濾色譜法用的凝膠柱，流動相大多是緩沖溶液。每次用完后，好馬上用蒸餾水沖干凈；如果要連續(xù)使用且計劃讓色譜柱過夜放置，可以在柱里留著緩沖溶液，但得保持較低的流速運行，防止鹽分析出來。這里要特別注意，要是流動相里有鹵化物這類有腐蝕性的成分，就算只放一夜，也必須用蒸餾水把色譜柱徹底沖干凈，避免柱子和系統(tǒng)被腐蝕。

表 1.不同色譜模式的清洗方法對比?

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清洗常見問題及解決辦法

問題 1：清洗后柱壓依然偏高

這大多是因為柱內殘留了難洗脫的雜質，或者有微小顆粒堵塞了柱床?？梢試L試提高洗脫溶劑的強度（比如反相柱可將甲醇換成異丙醇），延長沖洗時間，或者用低流速（0.2-0.3mL/min）沖洗 30-60 分鐘，讓溶劑充分接觸殘留雜質；如果是顆粒堵塞，可先斷開檢測器，用過濾后的溶劑反向沖洗色譜柱（需確認柱子是否允許反向沖洗，參考說明書），幫助沖出顆粒。

問題 2：清洗后色譜峰形變寬、分離度下降

可能是清洗時溶劑切換太突然，導致固定相收縮或受損。比如從高水相直接換成純有機溶劑，反相柱的固定相容易因脫水收縮。解決辦法是下次清洗時，逐步提高有機溶劑的比例（每次增加 10%-20%），讓固定相有適應過程；如果峰形變化明顯，可嘗試用低濃度的流動相（如 5% 甲醇水溶液）低流速沖洗，讓固定相慢慢恢復狀態(tài)。

問題 3：緩沖鹽殘留導致柱內出現白色結晶

這是沒徹底沖洗鹽分就換有機溶劑的典型問題。一旦出現結晶，先斷開檢測器，用蒸餾水以低流速（0.1-0.2mL/min）緩慢沖洗，讓結晶逐漸溶解（不可用高流速，避免結晶劃傷柱床），沖洗時間根據結晶量調整，通常需要 1-2 小時，直到柱壓恢復正常，再按常規(guī)步驟清洗。

二、液相色譜儀色譜柱的存放

色譜柱暫時不用的時候，存放條件好不好，會直接影響它的使用壽命和性能穩(wěn)定性，所以存放環(huán)節(jié)也不能馬虎。

1. 不同時長的存放方法

短期存放（數天內）

日常清洗完色譜柱后，把柱子兩端用專用的密封堵頭擰緊 —— 堵頭一定要選配套的，不然密封不嚴會讓空氣進去，還會導致溶劑揮發(fā)。之后放在常溫、干凈的環(huán)境里就行，不用額外做復雜操作，注意別放在靠近熱源或陽光直射的地方。

長期存放（數周以上）

要是存放時間超過幾周，只簡單密封可不夠，沒法保證柱效。這時候得按照色譜柱說明書上的推薦，選合適的保存溶劑把柱體充滿：

反相色譜柱：一般推薦用甲醇當保存溶劑，甲醇能很好地保持固定相的濕潤狀態(tài)，還能抑制微生物生長；

正相色譜柱：可以選正己烷或者庚烷這類有機溶劑，避免固定相吸潮；

凝膠色譜柱：可不能直接用水保存，不然容易滋生微生物，影響柱效。建議先用 0.05% 疊氮化鈉（NaNs）水溶液沖洗，再密封保存，疊氮化鈉能有效抑制微生物繁殖，但使用時要注意防護，避免接觸皮膚。

不管是哪種色譜柱，長期存放前都得確保柱里充滿對應的保存溶劑，而且兩端要嚴格密封。要是溶劑揮發(fā)了，固定相可能會干涸、收縮，到時候柱效會大幅下降，甚至柱子會直接損壞，就得不償失了。

表 2.不同時長的色譜柱存放方法對比

存放常見問題及解決辦法

問題 1：短期存放后，柱子內出現氣泡

大多是密封堵頭沒擰緊，空氣進入柱內導致的。可以先將色譜柱連接到系統(tǒng)，用保存溶劑（如反相柱用甲醇）以低流速（0.2-0.3mL/min）沖洗，讓氣泡隨溶劑排出，沖洗 10-15 分鐘后，斷開柱子，重新擰緊堵頭即可；下次存放前，記得檢查堵頭是否完好，擰緊時力度適中，避免過度用力損壞柱端。

問題 2：長期存放后，凝膠柱內出現絮狀物（微生物滋生）

這是因為保存時沒使用含抑菌劑的溶劑，或者溶劑濃度不夠。先丟棄柱內原有溶劑，用蒸餾水沖洗柱子 1 小時，再用 0.1% 疊氮化鈉水溶液以低流速沖洗 30 分鐘，徹底殺滅微生物，之后換成新鮮的 0.05% 疊氮化鈉水溶液充滿柱體，重新密封存放；如果絮狀物較多，柱子性能可能已受損，可通過進樣標準品測試柱效，若柱效下降超過 30%，可能需要更換柱子。

問題 3：長期存放后，正相柱分離度明顯下降

可能是存放環(huán)境濕度太大，固定相吸潮導致的。先將柱子連接系統(tǒng)，用正己烷 - 異丙醇混合溶劑（95:5）低流速沖洗 30 分鐘，去除柱內潮氣，再換成純正己烷充滿柱體，重新密封后放在干燥環(huán)境（可放少量干燥劑）中存放；下次存放時，建議將正相柱放在密封的干燥器里，避免吸潮。

總的來說，按照規(guī)范的流程清洗和保存色譜柱，不僅能讓柱子用得更久，還能保證分析結果的重復性和準確性，這在液相色譜實驗的質量管理中可是很重要的一環(huán)。

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